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Bases moleculares asociadas al potencial invasivo de neumococo (2019)Trabajo relevante
VCOMAS
, RIAL A.
, Chabalgoity, JA.
Publicado
Resumen
Evento: Nacional
Descripción: II Congreso nacional de Biociencias 2019
Ciudad: Montevideo
Año del evento: 2019
Publicación arbitrada
Medio de divulgación: Internet
http://www.biociencias2019.uy
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Unravelying pathogenic mechanisms during pneumococcal infection (2017)Trabajo relevante
VCOMAS
, RIAL A.
, Chabalgoity, JA.
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: Mucosal Immunology 2017
Ciudad: Salvador de Bahía
Año del evento: 2017
Areas de conocimiento:
Ciencias Médicas y de la Salud / Medicina Básica /
Inmunología /
Medio de divulgación: Papel
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Mechanisms underlying pneumococcal nasopharyngeal colonization in the absence of IL-17A (2017)
P C
, AR
, JCH
, JMM
, VCOMAS
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: Mucosal Immunology 2017
Ciudad: Salvador de Bahía
Año del evento: 2017
Palabras clave:
Inmunidad de mucosas
Areas de conocimiento:
Ciencias Médicas y de la Salud / Medicina Básica /
Inmunología /
Medio de divulgación: Internet
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Immune mechanisms involved in protection against pneumococcal pneumonia (2017)
AR
, P C
, JMM
, VCOMAS
, JCH
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: Mucosal Immunology 2017
Ciudad: Salvador de Bahía
Año del evento: 2017
Palabras clave:
Protective Immunity
Areas de conocimiento:
Ciencias Médicas y de la Salud / Medicina Básica /
Inmunología /
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IL-17A and Streptococcus pneumoniae respiratory infection: prospects for the development of new immunotherapies (2016)
AR
, P C
, VCOMAS
, J MM
, Y IGUAKURA
, N M
, JCH
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: Vaccine Technology VI
Ciudad: Albufeira, Portugal
Año del evento: 2016
Palabras clave:
IL-17A
Th 17 cells
Areas de conocimiento:
Ciencias Médicas y de la Salud / Medicina Básica /
Inmunología /
Inmunidad de mucosas-Vacunas
Medio de divulgación: Papel
Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae constitutes a pre-requisite for development of pneumonia and invasive pneumococcal diseases. Colonization is typically asymptomatic and is resolved due to a dynamic and complex interplay between microbiota, host immune system and environmental factors. Working with a murine model of pneumococcal nasopharyngeal colonization, we have shown that IL-17A is a key cytokine in this process, since Il17a-/- mice were persistently colonized for up to 6 months whereas wild type mice cleared colonization in 10 days. We are currently trying to elucidate the downstream mechanisms that may account for the phenotype showed in Il17a-/- mice, including the production of specific antibodies, as well as the recruitment of innate cells and the expression of immune mediators in WT and Il17a-/- mice. On the other hand, we have studied the role of IL-17A in the development of protective immunity against acute pneumococcal pneumonia. Previously, we showed that prior sublethal infection resulted in solid protection against invasive pneumonia which is associated with over expression of IL-17A together with the presence of Th17 cells in the lungs. However, Il17a-/- mice showed same level of protection than WT, demonstrating that IL-17A by itself is not essential for protective immunity. Interestingly Il17a-/- mice showed overexpression of other IL-17 related genes suggesting a complex network where compensatory effects may be occurring. Finally, we have developed and tested alternative immunotherapies against pneumococcal pneumonia, and have evaluated the role of IL17A in the protection afforded. Overall, we believe that deciphering the molecular basis of protective immunity will result in the development of new cost-effective immunotherapies against pneumococcal pneumonia.
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Caracterización de cepas de virus de Influenza A H1N1PDM circulantes en Uruguay mediante secuenciación masiva (2015)
VCOMAS
, SOÑORA M
, FAJARDO A
, PM
, MORATORIO G
, J C
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: XI Congreso Argentino de Virología
Ciudad: Buenos Aires, Argentina
Año del evento: 2015
Palabras clave:
VIRUS INFLUENZA
Secuenciación masiva
Areas de conocimiento:
Ciencias Naturales y Exactas / Ciencias Biológicas /
Virología /
Secuenciación masiva
La gripe es una enfermedad de gran trascendencia a nivel de salud pública, ya que es la principal causa de muerte por infecciones respiratorias en humanos, presentando tasas de mortalidad anual de entre 250 a 500 mil casos a nivel mundial. El agente etiológico de esta enfermedad es el virus de la influenza A (VIA), virus perteneciente a la familia Orthomixoviridae. Como la mayoría de los virus cuyo genoma está compuesto por ARN estos virus presentan elevadas tasas de mutación, por lo que estos virus circulan como complejas poblaciones virales constituidas por múltiples variantes genéticamente relacionadas, denominadas cuasiespecies. Esta característica le permite al virus evolucionar y adaptarse a nuevos ambientes y hospederos, representando blancos móviles para la intervención terapéutica, evolucionando hacia la resistencia a vacunas y drogas antivirales.
La caracterización de las variantes epidémicas, debido a cambios en HA y NA, es de suma importancia a la hora de la formulación vacunal, así como para la vigilancia de cepas resistentes a drogas antivirales.
El objetivo del presente trabajo es profundizar en la vigilancia de las cepas H1N1pdm que circularon en nuestro país y en la región entre los años 2009 y 2013, realizando una detallada caracterización de la diversidad poblacional mediante secuenciación masiva y evaluar la relación de éstas con la cepa vacunal así como posibles marcadores de resistencia a los antivirales.
Con este fin se analizaron nueve muestras de pacientes positivos para VIA H1N1pdm.Se realizó la extracción del ARN y partir de los cDNA obtenidos se amplificaron por PCR los genes HA y NA. Los productos fueron purificados y secuenciados por Sanger para su identificación y posteriores análisis filogenéticos.
Posteriormente utilizando estos amplicones se realizó la secuenciación masiva de los mismos en la plataforma MiSeq de Illumina.Para el análisis de los datos se utilizó el pipeline Viral Variance Analysis (ViVan).
Los análisis filogenéticos para ambos genes mostraron una relación genética distante entre la cepa vacunal y las cepas analizadas. Asimismo, difirieron de la cepa vacunal en varias posiciones aminoacídicas. La mayoría de éstas sustituciones se localizaron en la superficie de las proteínas y para el caso de NA, las mismas no interfieren con el sitio activo de la enzima. Si bien en las secuencias consenso no se identificaron marcadores de resistencia a los actuales antivirales, los datos de secuenciación masiva permitieron la identificación de variantes minoritarias para de algunos de los marcadores en cinco de las nueve muestras analizadas. Además los datos mostraron una gran diversidad en distintas posiciones relacionadas a epítopes de superficie. La continua vigilancia de las cepas circulantes a través de métodos de secuenciado profundo es de suma importancia para identificar variantes minoritarias que podrían poseer la capacidad de emerger frente a diferentes presiones selectivas.
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Implentación de un sistema de infección natural por Coxsackie Virus B3 (2014)
VCOMAS
, A BORDERíA
, JC
, PM
, M VIGNUZZI
, MORATORIO G
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: XV Jornadas de la Sociedad Uruguaya de Biociencias,
Ciudad: Maldonado, Uruguay
Año del evento: 2014
Palabras clave:
Patogenesis viral
Areas de conocimiento:
Ciencias Médicas y de la Salud / Biotecnología de la Salud /
Tecnologías que involucran la manipulación de células, tejidos, órganos o todo el org /
Patogénesis viral
Los enterovirus son un grupo de agentes virales responsables de importantes y frecuentes enfermedades humanas. A pesar de ser transmitidos por vía fecal-oral, la mayoría de los estudios in-vivo son realizados mediante infecciones vía intraperitoneal o intramuscular. Es por este motivo que surge la necesidad de implementar una metodología que simule lo que ocurre en la naturaleza. En el marco de un proyecto en el cual se está trabajando con Coxsackie Virus B3 (CVB3) para estudiar el rol de la robustez genética en la evolución de virus ARN, el objetivo de este trabajo fue implementar una metodología de infección natural. Siendo ésta una valiosa herramienta para el estudio de aspectos relacionados con la patogenia y evolución y para comparar resultados obtenidos por una vía de infección no natural.
Se utilizó un sistema de genética reversa para la generación de stocks virales de CVB3. Asimismo, se emplearon diferentes cepas de ratones, como Balb/c y C3H, así como diferentes edades y títulos virales (5.105, a 1.107 TCID50 /ml), llevándose a cabo la infección oral (gavage) mediante la utilización de una sonda. Finalmente, se recolectaron muestras de distintos órganos para los análisis cuantitativos de genomas virales por RT-PCR en tiempo real. A partir de los virus obtenidos se realizaron ensayos de plaqueo y de dilución límite.
Como conclusión, podemos decir que se logro poner a punto una metodología para la infección natural por CVB3. El aumento en el título, así como el uso de ratones más jóvenes permitió efectivamente recrear una infección natural.
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Evolución y variabilidad genética del virus de la Influenza A/H1N1pandemico circulante en Uruguay (2013)
VCOMAS
, SOÑORA M
, M CAPETTA
, R URIARTE
, S BOSCHI
, PM
, MORATORIO G
, FAJARDO A
, JC
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: I Congreso Latinoamericano de Virología
Ciudad: Bogota, Colombia
Año del evento: 2013
Palabras clave:
Influenza Virus
Areas de conocimiento:
Ciencias Naturales y Exactas / Ciencias Biológicas /
Virología /
Virus Evolution
Medio de divulgación: Papel
Antecedentes: En el 2009, una nueva variante del virus de la Influenza A (VIA) H1N1 ingresó a la población humana causando la primer pandemia del siglo XXI, reemplazando a las variantes VIA/H1N1 que circulaban anteriormente. VIA posee un genoma de ARN y su variabilidad genética radica en la alta tasa de error en la replicación, debido a la baja fidelidad de su polimerasa. Esta característica da lugar a que este virus circule como un conjunto de variantes estrechamente relacionadas desde el punto de vista genético denominadas cuasiespecies. Esto permite a la población ser capaz de emerger y adaptarse a nuevos ambientes representando blancos móviles para la intervención terapéutica, como la resistencia a drogas antivirales. La caracterización molecular de los VIA circulantes es esencial para la detección de mutaciones que puedan incrementar la virulencia, la resistencia a antivirales y el escape a la respuesta inmune.
Objetivo: Estudiar la variabilidad genética del VIA/H1N1 circulante en Uruguay.
Metodología: Se analizaron 56 muestras obtenidas entre 2009 y 2013. Se amplificó y secuenció el segmento codificante para la neuraminidasa y se procedió a la realización de diversos análisis filogenéticos.
Resultados: Se observó la existencia de dos sublinajes de VIA circulantes en Uruguay, siendo la mutación S299A la responsable de ésta diversificación. Esta mutación ha sido reportada únicamente en Italia y Marruecos, no así en variantes de la región sudamericana. Asimismo, los estudios evidencian que la relación filogenética entre las cepas circulantes en Uruguay y la cepa vacunal es muy distante.
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Variabilidad genética del virus de la Influenza A/H3N2 circulante en Uruguay en la temporada invernal 2011- 2012 (2013)
SOÑORA M
, VCOMAS
, PM
, MORATORIO G
, FAJARDO A
, S BOSCHI
, R URIARTE
, JC
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: I Congreso Latinoamericano de Virología
Ciudad: Bogota, Colombia
Año del evento: 2013
Areas de conocimiento:
Ciencias Naturales y Exactas / Ciencias Biológicas /
Virología /
Virus Evolution
Medio de divulgación: Papel
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Hacia la caracterización de poblaciones de cuasiespecies del virus de Influenza A/H1N1 pandemico circulante en Uruguay (2013)
VCOMAS
, SOÑORA M
, M CAPETTA
, R URIARTE
, S BOSCHI
, PM
, MORATORIO G
, FAJARDO A
, JC
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: 8ª Jornadas de la Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular (SBBM) de la sociedad Uruguaya de Biociencias (SUB)
Ciudad: Montevideo, Uruguay
Año del evento: 2013
Areas de conocimiento:
Ciencias Naturales y Exactas / Ciencias Biológicas /
Virología /
Virología Molecular
Medio de divulgación: Papel
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Variabilidad genética del virus de la Influenza A/H3N2 circulante en Uruguay en la temporada invernal 2011- 2012 (2013)
SOÑORA M
, VCOMAS
, PM
, MORATORIO G
, FAJARDO A
, S BOSCHI
, R URIARTE
, JC
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: 8ª Jornadas de la Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular (SBBM) de la sociedad Uruguaya de Biociencias (SUB)
Ciudad: Montevideo, Uruguay
Año del evento: 2013
Areas de conocimiento:
Ciencias Naturales y Exactas / Ciencias Biológicas /
Virología /
Virología Molecular
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Filodinámica y teoría del coalescente: reconstrucción de la historia de VHC en EEUU (2012)
ECHEVERRÍA, N.
, FAJARDO A
, FISCHER, S
, SOÑORA M
, VCOMAS
, PM
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: XIV Jornadas de la Sociedad Uruguaya de Biociencias
Ciudad: Maldonado, Uruguay
Año del evento: 2012
Medio de divulgación: Papel
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Optimización de PT-PCR para la caracterización molecular del virus de Influenza circulante en Uruguay durante la temporada invernal 2011. (2012)
SOÑORA M
, VCOMAS
, MORATORIO G
, URIARTE M
, PM
, CAPPETTA M
, BOSCHI S
, CRISTINA J
Publicado
Resumen
Evento: Nacional
Descripción: XIV Jornadas de la Sociedad Uruguaya de Biociencias (SUB)
Ciudad: Piriapolis, Maldonado
Año del evento: 2012
Palabras clave:
Virus de la Influenza
Areas de conocimiento:
Ciencias Naturales y Exactas / Ciencias Biológicas /
Virología /
Virología Molecular
Medio de divulgación: Papel
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Estudio de una estrategia para el análisis de genomas completos de virus Influenza A/H1N1 pandémico circulante en Uruguay en el año 2009. (2012)
VCOMAS
, SOÑORA M
, PM
, MORATORIO G
, NG
, CRISTINA J
Publicado
Resumen
Evento: Nacional
Descripción: XIV Jornadas de la Sociedad Uruguaya de Biociencias (SUB)
Ciudad: Piriapolis, Maldonado
Año del evento: 2012
Palabras clave:
Influenza A H1N1
Areas de conocimiento:
Ciencias Naturales y Exactas / Ciencias Biológicas /
Virología /
Virología Molecular
Medio de divulgación: Papel
El virus de la Influenza A (VIA) pertenece a la familia Orthomyxoviridae, cuyo genoma se compone de 8 segmentos de ARN de polaridad negativa. Cambios en la composición genética y antigénica constituyen la base de las epidemias y pandemias. En marzo del 2009 un nuevo VIA pandémico (pdm) subtipo H1N1 de origen porcino causo la primera pandemia del siglo XXI. Monitorear la composición genética de estos virus es esencial para entender la evolución dentro de un país con respecto a la diversificación a nivel mundial y buscar mutaciones que afecten el comportamiento del virus, para poder implementar programas efectivos de prevención y control, así como para diseñar vacunas apropiadas y efectivas para las cepas circulantes. En este trabajo se desarrollo una estrategia para obtener genomas completos de este virus a través de técnicas de biología molecular, siendo las secuencias de NP, NS y M, PB1, PB2 y PA, las primeras secuencias obtenidas de VIA pdm que circularon en Uruguay en el año 2009. Se compararon estas secuencias con secuencias de otras partes del mundo y con la cepa vacunal recomendada para el hemisferio sur en el año 2010. Análisis filogenéticos de estos segmentos concatenados permitió determinar que las cepas de Uruguay pertenecen al clado 7, el cual no incluye la cepa vacunal. Por otro lado, la caracterización molecular de estos segmentos ha determinado que las muestras de Uruguay son resistentes a los adamantanos y sensibles al oseltamivir, a pesar del continuo aumento de cepas resistentes para este último antiviral.
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Analisis en el uso de codones para el gen de la Hemaglutinina de virus de la Influenza A H1N1 pandémico circulante en el año 2009 (2011)
NG
, VCOMAS
, SOÑORA M
, PM
, MUSTO M
, CRISTINA J
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: X Congreso Argentino de Virología
Ciudad: Buenos Aires, Argentina
Año del evento: 2011
Palabras clave:
Uso de codones
Areas de conocimiento:
Ciencias Naturales y Exactas / Ciencias Biológicas /
Virología /
Evolución Molecular
Medio de divulgación: Papel
Dado que la replicación de los virus Influenza depende de la maquinaria del hospedero, el uso de codones de los genes virales esta sometido a la presión selectiva del mismo. Por esta razón, es necesario una detallada comprensión de la evolución de los virus Influenza, en particular del gen de la hemaglutinina (HA), la cual es la proteína blanco de la respuesta inmune del hospedero.
En este estudio se realizó una análisis de la HA de 753 cepas de Influenza A H1N1 pdm que circularon durante el año 2009. Los resultados obtenidos revelaron que la composición nucleotidica y la frecuencia de los dinucleotidos juegan un rol importante en el sesgo de uso de codones observado en el gen HA de las cepas que circularon dicho año. La frecuencia de los aminoácidos aromáticos es también una caracteristica en la variación de la composición aminoacídica en el gen HA. Otro dato relevante es la observación de que los dinucleotidos CpG contenidos en los codones están marcadamente suprimidos o no son usados en su mayoría, en las 753 cepas incluidas en este estudio.
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Desarrollo de una estrategia para el análisis de genomas completos del virus de la Influenza A H1N1 pandémico circulante en Uruguay en el año 2009 (2011)
VCOMAS
, SOÑORA M
, MORATORIO G
, PM
, CRISTINA J
, NG
Publicado
Resumen
Evento: Internacional
Descripción: 7as Jornadas SBBM
Ciudad: Montevideo
Año del evento: 2011
Areas de conocimiento:
Ciencias Naturales y Exactas / Ciencias Biológicas /
Virología /
Virología Molecular
Medio de divulgación: Otros
El virus de la influenza A (VIA) pertenece a la familia Orthomyxoviridae y
contiene un genoma de ARN constituido por ocho segmentos. Dentro de los
VIA existen diferentes subtipos que se clasifican de acuerdo a las
glicoproteínas de superficie: la hemaglutinina (HA) y la neuraminidasa (NA).
Cambios frecuentes en estas proteínas constituyen la base de las epidemias y
pandemias. En marzo 2009 surgió un nuevo VIA pandémico H1N1 de origen
porcino. Su genoma es producto de una combinación de segmentos
provenientes de cerdos y aves de Norteamérica, de humanos y de cerdos de
Eurasia. Los objetivos de este trabajo son desarrollar un método para obtener
genomas completos de estas cepas y determinar el grado de variabilidad de las
mismas. Actualmente hemos optimizado los genes HA, NA, matriz (M) y no
estructural (NS) de tres muestras de VIA subtipo H1N1 pandémicas que
circularon en 2009 en Uruguay. Para realizar este objetivo se amplificó la carga
viral de estas muestras mediante el pasaje por cultivos celulares y
posteriormente se realizó la extracción de RNA y la RT-PCR para estos 4
genes utilizando cebadores previamente diseñados. Con las secuencias
obtenidas se identificará el modelo evolutivo que mejor describa nuestros datos
y construirá árboles filogenéticos. El conocimiento del genoma completo de VIA
nos proporcionará información de los procesos epidemiológicos, de qué
manera ocurren, migran, co-circulan y se reordenan cepas circulantes
permitiendo la formulación de mejores vacunas para nuestro país y la región,
siendo las cepas H1N1 pandémicas posibles futuras cepas vacunales.
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Optimización de RT-PCR para la caracterización molecular del virus de la Influenza A circulante en Uruguay en la temporada invernal 2011 (2011)
SOÑORA M
, VCOMAS
, NG
, CAPPETTA M
, BOSCHI S
, CRISTINA J
, URIARTE M
, PM
Publicado
Resumen
Evento: Nacional
Descripción: 7as Jornadas SBBM
Ciudad: Montevideo
Año del evento: 2011
Areas de conocimiento:
Ciencias Naturales y Exactas / Ciencias Biológicas /
Virología /
Virología Molecular
Medio de divulgación: Internet
La sorpresiva aparición de una variante del virus influenza A/H1N1 en abril del
2009 condujo a declarar la inminente llegada de la primer pandemia del siglo
XXI y con esto la urgencia por resolver dicho problema. Este trabajo busca
mediante el análisis filogenético de las proteínas hemaglutinina (HA) y
neuraminidasa (NA) establecer relaciones genéticas y antigénicas entre
estirpes virales circulantes en nuestro país durante la temporada invernal 2011.
Para ello se realizarán análisis comparativos contra las estirpes circulantes en
la región para esta misma temporada, así como con las estirpes incluidas en la
vacuna recomendada por la OMS. Con este fin se planteó la necesidad de
desarrollar y optimizar una RT-PCR que permita la amplificación de los genes
NA y HA de los virus de Influenza A (VIA) H1N1, H3N2 y del virus de Influenza
B. Mediante esta metodología podremos secuenciar las estirpes de VIA
circulantes en Uruguay en dicha temporada. Una vez optimizada esta técnica
se realizará el estudio de exudados nasales de pacientes uruguayos con
síntomas clínicos de influenza, provenientes de la Asociación Española Primera
de Socorros Mutuos (AESPM). A través del análisis filogenético de las
secuencias obtenidas, y las reportadas en el banco de datos, se determinarán
las relaciones filogenéticas de interés. La vigilancia mundial de la Influenza es
esencial para brindar información sobre cepas circulantes, ya que su rápida
identificación durante la temporada invernal provee valiosa información a las
autoridades de salud pública y posibilita una vacunación apropiada y
tratamiento profiláctico para grupos de alto riesgo.