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Alfaherpesvirus bovino 1 defectivo en la glicoproteína E: atenuación e inmunogenicidad tras la inmunización intranasal en presencia de inmunidad pasiva (03/2019 - 03/2022 )
El alfaherpesvirus bovino 1 (BoHV-1) está asociado con manifestaciones clínicas respiratorias y reproductivas. Una de las herramientas utilizadas para el control de las infecciones por BoHV-1 son las vacunas que permiten la diferenciación serológica entre animales vacunados e infectados de forma natural, como es el caso de las vacunas defectivas en la glicoproteína viral E (gE). La inmunidad pasiva, adquirida vía calostro, también representa un obstáculo para la vacunación de terneros, especialmente cuando se realiza por vía intramuscular o subcutánea.
Así, el presente proyecto tiene como objetivo evaluar la atenuación e inmunogenicidad de una cepa de BoHV-1 defectiva en gE, SV56/90gE-, administrada por vía intranasal (IN). Para el análisis de atenuación, seis terneros serán inoculados con la cepa SV56/90gE- y otros seis animales serán inoculados con la cepa parental SV56/90. Los animales serán monitoreados durante 15 días post-inoculación (p.i.), evaluando signos clínicos y excreción viral. Se recogerán muestras de secreciones nasales y oculares el día cero y durante 15 días, que se someterán a PCR y aislamiento viral.
Se tomarán muestras de sangre los días 0, 15, 40 y 60 p.i., y se analizarán mediante seroneutralización (SN) y ELISA anti-gE. A los 40 días p.i., los animales serán tratados con dexametasona y luego monitoreados durante 15 días, evaluando signos clínicos y excreción viral.
Para investigar la inmunogenicidad en presencia de inmunidad pasiva, la cepa SV56/90gE- será inoculada en seis terneros con anticuerpos maternos, mientras que otros seis terneros, también seropositivos para BoHV-1, permanecerán como controles negativos. En el día 60, los animales serán sometidos a un desafío viral utilizando la cepa de BoHV-1 EVI123. Los animales serán monitoreados clínicamente, serológicamente (SN) y en cuanto a la excreción viral durante 180 días.
Al final, se espera demostrar que la cepa SV56/90gE- es atenuada e inmunogénica tras la inoculación por vía IN incluso en presencia de anticuerpos maternos.
20 horas semanales
Investigación
Coordinador o Responsable
Concluido
RRHH formados en el proyecto:
Pregrado:2
Especialización:1
Maestría/Magister:1
Maestría/Magister prof:2
Doctorado:3
Equipo:
Ingryd Merchioratto
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Reversa genética para la producción de cepas vacunales de pestivirus bovino (03/2020 - 03/2022 )
El presente proyecto propone el uso/manipulación de este clon para la producción de cepas virales con un fenotipo más adecuado para la producción de vacunas. En una primera etapa, se producirán clones de ADNc que contengan la región de las proteínas estructurales (C-E0-E1-E2) de BVDV-2 y HobiPeV, utilizando como base el clon pBSC-IBSP4-NS2/3NADL. De esta forma, considerando que el clon parental contiene las proteínas estructurales del BVDV-1, se podrán obtener virus citopáticos con características antigénicas de las tres especies de pestivirus, lo que permitirá la producción de vacunas trivalentes (BVDV-1/BVDV-2/HobiPeV) que ofrezcan protección de amplio espectro.
En una segunda etapa, en los tres clones construidos también se introducirán una deleción parcial en Npro y la deleción de la histidina en la posición 349 de E0, haciendo que las cepas sean seguras para su uso en vacas preñadas, ya que estas mutaciones reducen o eliminan la capacidad de los virus para atravesar la placenta y producir infecciones fetales persistentes.
La ejecución de este proyecto permitirá explorar las potencialidades del clon infeccioso previamente construido, haciendo viable la obtención de cepas vacunales con propiedades biológicas y antigénicas altamente deseables y, por ello, con gran potencial industrial/comercial. Además, el desarrollo del proyecto permitirá la sedimentación/consolidación de la tecnología de genética reversa en nuestro laboratorio, contribuyendo al avance científico-tecnológico y a la formación de recursos humanos.
10 horas semanales
Desarrollo
Integrante del Equipo
Concluido
RRHH formados en el proyecto:
Maestría/Magister prof:3
Doctorado:2
Equipo:
Ingryd Merchioratto , Eduardo Furtado Flores (Responsable) , José Valter Joaquim Silva Júnior , Pablo Sebastian Britto De Oliveira , Rudi Weiblen (Responsable)
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Evaluación serológica de rebaños búfalos para los virus causantes de enfermedades reproductivas y vesiculares (03/2020 - 03/2021 )
Los búfalos son animales rústicos y de alta adaptabilidad a diferentes climas y regiones, por lo que representan una alternativa para la producción de carne y leche en el sector pecuario. Además, poseen una mayor resistencia a enfermedades, que generalmente se presentan de forma subclínica o con signos en etapas avanzadas. Sin embargo, a menudo se crían junto con bovinos o tienen contacto con ellos, lo que facilita la transmisión de enfermedades infecciosas entre estas especies.
El virus de la diarrea viral bovina (BVDV) es un Pestivirus de la familia Flaviviridae, ARN, que comprende tres genotipos: BVDV 1, BVDV 2 y HoBi-like. El herpesvirus bovino tipo 1 (BoHV-1) es el agente causante de la rinotraqueítis infecciosa bovina (IBR), un virus ADN perteneciente a la familia Alphaherpesvirinae, género Varicelovirus. Ambos virus frecuentemente provocan enfermedades reproductivas en bovinos y son responsables de altas tasas de abortos en los rebaños.
El virus vaccinia (VACV) es un prototipo del género Orthopoxvirus, familia Poxviridae, ADN, y tiene los grupos virales VACV 1 y 2. El virus de la estomatitis vesicular (VSV) es un Vesiculovirus perteneciente a la familia Rhabdoviridae, ARN, clasificado en dos subgrupos: New Jersey (VSNJV) e Indiana (VSIV). Tanto el virus vaccinia como el virus de la estomatitis vesicular son considerados causantes de lesiones vesiculares en la piel del hospedador.
Los cuatro virus afectan principalmente a bovinos, pero estudios han demostrado que los búfalos también son susceptibles a la infección al entrar en contacto con bovinos. Por lo tanto, se evaluarán 581 muestras de suero de búfalos provenientes del Distrito Federal (DF) para determinar la prevalencia de anticuerpos en suero mediante pruebas de seroneutralización (SN) y evaluar la ocurrencia y circulación de estas enfermedades en estos rebaños.
10 horas semanales
Investigación
Integrante del Equipo
Concluido
RRHH formados en el proyecto:
Pregrado:1
Especialización:1
Maestría/Magister:1
Maestría/Magister prof:2
Doctorado:3
Equipo:
Ingryd Merchioratto
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Inmunogenicidad y eficacia preclínica de dos prototipos vacunales atenuados contra el virus del Nilo Occidental (03/2019 - 03/2021 )
El virus del Nilo Occidental (West Nile Virus, WNV) es uno de los patógenos emergentes más importantes de las Américas debido a su potencial zoonótico y su impacto en la equinocultura. La reciente introducción del WNV en Brasil, donde existen condiciones ecológicas ideales para su propagación y mantenimiento, genera gran preocupación entre las autoridades sanitarias de las áreas humana y animal. En este sentido, la disponibilidad de vacunas para uso en humanos y animales debe formar parte de la estrategia de prevención de la enfermedad.
Con el objetivo de abordar esta problemática y avanzar en una estrategia de control, el presente proyecto propone dar continuidad a un estudio para el desarrollo de una vacuna recombinante atenuada contra el WNV. En dicho estudio ya se construyeron tres virus quiméricos utilizando la cepa vacunal del virus de la fiebre amarilla 17D (YFV-17D) como plataforma. Inicialmente, se construyó un virus quimérico YFV y WNV mediante la sustitución de los genes de las glicoproteínas prM/E del YFV por los genes correspondientes del WNV. Se logró una atenuación adicional de este virus quimérico introduciendo tres mutaciones puntuales específicas en los genes prM/E, y este virus fue denominado YFV-WNV3M.
Una tercera quimera fue desarrollada añadiendo a la quimera YFV-WNV3M una sustitución adicional del gen no estructural NS1 del YFV por el correspondiente gen del WNV, dando lugar a la quimera YFV-WNV3M-prM/E/NS1. Debido a la falta de recursos, este estudio fue interrumpido. Por lo tanto, proponemos aquí continuar con este trabajo realizando la caracterización de la estabilidad genética de las quimeras construidas en células y en ratones, y evaluando la capacidad inmunogénica de las quimeras en ratones.
Se anticipa que la caracterización de los virus quiméricos YFV-WNV y los ensayos preclínicos en ratones representarán una etapa importante en la estrategia de prevención de esta zoonosis, proporcionando una tecnología avanzada para la producción de vacunas eficaces para uso animal y, eventualmente, humano. Además, el desarrollo del proyecto resultará en la implementación de tecnología y en la formación de recursos humanos en esta importante área de la biotecnología aplicada a la salud humana y animal.
10 horas semanales
Investigación
Integrante del Equipo
Concluido
RRHH formados en el proyecto:
Maestría/Magister:1
Maestría/Magister prof:4
Doctorado:5
Equipo:
Ingryd Merchioratto , Eduardo Furtado Flores (Responsable) , José Valter Joaquim Silva Júnior , Pablo Sebastian Britto De Oliveira , Bruna Portolan Amaral , Bruno Martins , / Giovani Rota Bertani , Laura Helena Vega Gonzales Gil
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Desarrollo de una plataforma multiplex para diagnóstico molecular diferencial de COVID-19 (04/2020 - 12/2020 )
En noviembre/diciembre de 2019, un nuevo coronavirus, oficialmente denominado SARS-CoV-2, surgió en China continental y ha sido responsable de la actual pandemia de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19). Desde su primera identificación hasta la fecha, las infecciones por SARS-CoV-2 han sido reportadas en 187 países (y/o regiones), con casi 4 millones de individuos infectados y más de 264 mil muertes.
Precisamente en Brasil, en un intervalo de aproximadamente cuatro meses, desde su probable ingreso en enero/febrero hasta mayo de 2020, las cifras oficiales reportan aproximadamente 125 mil casos y más de 8 mil muertes por COVID-19. En lo que respecta a Rio Grande do Sul, hasta el momento se han contabilizado más de 2 mil casos y 87 muertes.
Aunque estas cifras son considerables, es prudente considerar que representan solo una parte de la demanda de diagnóstico que ha sido atendida, evidenciando la posibilidad de subnotificación de la COVID-19. Como agravante, a partir de los meses de abril/mayo, existe una expectativa científicamente respaldada de un aumento en la notificación de infecciones respiratorias, principalmente por virus respiratorio sincitial, influenza y adenovirus, que ciertamente requerirán un mayor esfuerzo para el diagnóstico diferencial de las infecciones por SARS-CoV-2.
De esta manera, el presente proyecto propone el desarrollo de una plataforma multiplex para el diagnóstico diferencial de COVID-19 frente a los principales virus de infección respiratoria en Rio Grande do Sul [influenza A (H1N1, H3N2 y no subtipada), influenza B y adenovirus]. Es importante destacar que este proyecto se llevará a cabo en colaboración con el Hospital Universitario de Santa María (HUSM), el cual ya tiene una rutina para el diagnóstico de infecciones por virus respiratorio sincitial y, por lo tanto, este agente no será incluido en el presente estudio.
Finalmente, esperamos no solo poner a disposición una plataforma para ayudar en el diagnóstico molecular de COVID-19, sino también realizar un diagnóstico diferencial para otros agentes infecciosos, contribuyendo así al seguimiento epidemiológico de los principales virus de infección respiratoria circulantes en el estado.
20 horas semanales
Desarrollo
Integrante del Equipo
Concluido
RRHH formados en el proyecto:
Pregrado:1
Especialización:1
Maestría/Magister:1
Maestría/Magister prof:2
Doctorado:3
Equipo:
Ingryd Merchioratto